“Bioline,siRNA轉染試劑,假病毒包裝,熒光定量PCR試劑,唾液DNA提取試劑”/

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幾種常用的轉染方法
發布者:百代生物  來源:  發布時間:2017-11-29

一、物理-化學方法

脂質體轉染法:采用脂質體轉染試劑,將遺傳物質如質粒, siRNA等轉移至細胞內。

此種方法易于操作且不需要許多步驟或特殊的專業知識。通常情況下,你只需要一種轉染試劑和一種兼容的生長培養基 (通常是低血清且具有良好的緩沖作用,使細胞在轉染過程中保持活性)。不同的廠商有自己的配方試劑,有些可以為特定的細胞系設計配方,所以檢查你的細胞系是否有最佳脂溶性配方。此外,這種方法可與一系列細胞兼容,如HEK 293.

                   


脂質體轉染試劑價格昂貴,但轉染效率高,從長遠來看是值得的。

 

DEAE-葡聚糖法:它是一種陽離子聚合物,可以與帶負電荷的DNA和蛋白質結合,進而被細胞吞噬。

聚合物濃度、核酸或蛋白質與聚合物的比值,以及轉染的持續時間是重要的優化參數,另外,此方法對附著細胞的轉染非常有效,也可用于某些懸浮細胞系。

缺點是一些細胞類型對葡聚糖特別敏感,可能會發生形態變化或者抑制細胞生長。 

磷酸鈣共沉淀法:DNA與濃縮的氯化鈣溶液混合,然后添加到含有磷酸鹽離子的緩沖液中,形成磷酸鈣-DNA沉淀物,從而被細胞吸收。


這種方法價格便宜且被廣泛使用,但這種方法轉染效率不穩定,可能會發生DNA聚集等,影響轉染的效率,對試劑濃度、PH值等的要求也比較高。

 

電穿孔法:將細胞短暫暴露于電場中,短脈沖使細胞膜暫時穿孔,可以吸收外來的遺傳物質,此方法也適用于傳遞蛋白質。


目前有許多電穿孔裝置,操作不需要專門的專業知識,但在購買之前一定要向供應商索要設備的演示,確保它對你的細胞系有效。最佳的電壓、持續時間和脈沖數可以增加外來材料的滲透性,對每個不同的細胞系你需要仔細優化這些參數。但是并不是所有細胞都能忍受電穿孔,有些細胞會死亡,另外,電穿孔儀也是相對昂貴的。


二、生物方法

腺病毒轉導:對于轉染困難的細胞,利用病毒載體將遺傳物質轉移到哺乳動物細胞中此方法存在病毒傳播的風險,需要適當的安全預防措施。另外,需要包裝細胞系產生能攜帶目的DNA的病毒顆粒。


成功轉染的訣竅:

 哺乳動物細胞系的轉染并不簡單,使用哪種方法取決于很多因素,例如: 你的實驗室的預算、電穿孔設備、你的細胞類型等等,選擇最適的轉染方法會有較好的轉染效率。


1.抗生素耐藥性示例----篩選轉染成功的細胞

引入遺傳物質(通常是一個質粒)的同時細胞會產生一種耐抗生素的基因。在轉染的最初階段,細胞可能會有點“萎靡”,需要時間來恢復,一兩天之后,你就可以把它們暴露在抗生素環境下。沒有接受質粒的細胞將無法承受,并且會死亡,你就可以用轉染的細胞繼續你的實驗。


2.盡早確定你的轉染效率

比較不同轉染方法的一個快速而簡單的方法是使用一個攜帶熒光標記蛋白的質粒,這樣你就可以在顯微鏡下觀察轉染的細胞。你可能需要嘗試幾種不同濃度的DNA / siRNA來確定你的細胞系的最佳轉染效率。


3.嘗試使用永生細胞系

與原始細胞系相比,永生細胞系無疑更容易工作,但仍然可能會觀察到細胞毒性作用,影響整個轉染效率。






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