關于熒光定量PCR，小編查閱了很多資料，然而對著一疊厚厚的資料卻打了隔。But，憑著對PCR的無(被)限(逼)熱（無）愛（奈），小編依然沒有放棄，終于，功夫不負有心人，在思過崖上找到了PCR的“獨孤九劍秘籍”，學了一招半式。在此分享給小伙伴們，望他日行走江湖時可以底氣十足。

首先，介紹幾個PCR相關術語。

擴增引物：人工合成的寡核苷酸序列，其序列與帶擴增的目標DNA序列中的一段相同，用于引導DNA體外擴增。

擴增模板：DNA體外擴增中所用的待擴增的靶標序列。

CT值：實時熒光PCR反應中每個反應管熒光信號達到設定的閾值所經歷的循環數。

熒光染料：可以和擴增產物結合而發出熒光的物質。

Taq酶：也叫DNA聚合酶，可以催化新DNA的合成。

溶解曲線：

使用染料法的時候，在PCR反應結束后，通過緩慢升溫，并實時監測熒光值，所得到的曲線。用于分析PCR產物是否特異、PCR產物之間的堿基差異。

首先，具備相關的反應物是PCR反應的前提。

當反應啟動之后，隨著不同的溫度及時間，反應步驟（過程）各有千秋。反應過程分為變性、退火和延伸三個階段。

1.變性階段是目標序列在解鏈。

2.退火階段是引物（primers）和解開的DNA單鏈結合。

3.延伸階段是在引物和聚合酶的引領下，反應利用體系的dNTPs合成新的DNA。

反應從變性到退火再到延伸稱為一個循環，反應通常需要持續多個循環，產物產生的熒光才能被檢測器檢測，因此被檢測到的閾值稱之為CT值，最終得到的DNA數量原則上為2n次方。

據小編所知，在實際操作過程中，反應一般需要進行小時，也就是說，在短時間內，我們完全可以大量得到需要的目的DNA片段，然后用作下一步實驗研究。熒光定量PCR目前已經廣泛用于醫療。植物保護、動物檢疫和食品安全等多個領域。這讓小編體會到了科技的神奇，原來一個小小的反應管里隱藏這么多的信息。