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熱啟動Taq酶試劑的比較
發布者:百代生物  來源:  發布時間:2023-10-16

    熱啟動Taq酶由于能夠很好的解決PCR中常出現的非特異性擴增、引物二聚體形成等問題,同時有效提高了目標基因的擴增成功率及產率,因而一直以來都備受科研人員的青睞。而一種擴增效率高、酶動力強、靈敏度高的熱啟動Taq酶對后續的實驗更是能起到積極的作用。


    目前,國內市場上銷售的熱啟動Taq酶的品牌很多,但真正高質量的熱啟動Taq酶并不多,國外品牌有ABI、Bioline等,國內品牌有BIOG、Probegene等。面對各品牌的熱啟動Taq酶,怎么選是關鍵。


    選擇高擴增效率的熱啟動Taq酶對PCR、qPCR能否成功很重要。我們實驗室對國內常用品牌的熱啟動Taq酶曾經進行過比較,將人RNase的一個片段質粒5倍梯度稀釋,將qPCR結果做成標準曲線,結果ABI和BIOG熱啟動Taq酶擴增效率都在95%以上,每反應體積能夠檢測的最低量可達2pg(如圖1),而某國際知名品牌T的熱啟動Taq酶的擴增效率只有90%,在模板量為2pg時無擴增曲線。

圖1. BIOGHC熱啟動Taq酶擴增人RNase的一個片段。以1ng人基因組DNA為模板,5倍系列稀釋。

可見,BIOGHC熱啟動Taq酶具有較高的反應靈敏度(1.6pg),重復性好,線性范圍寬。


    除了以高擴增效率為熱啟動Taq酶的選擇標準外,對于酶動力強這一點,我們也曾比較過多家公司的熱啟動Taq酶。在國外品牌中,英國Bioline公司的熱啟動Taq酶(lmmulase)酶動力較好,可做4重PCR,等量起始模板CT30時的熒光信號值最高。在國內品牌中,BIOG熱啟動Taq酶的指數期較長,可支持4重以內的PCR檢測反應、目擴增曲線的“S”型不受影響(圖2)。其它的國產品牌一般只能支持2重反應,在做3重反應時,擴增曲線低矮,熒光信號值較低,無典型擴增曲線,結果很難判定。

圖2. 使用BIOGHC熱啟動Taq酶檢測呼吸道病原體感染。1為內參基因擴增曲線,2為肺炎支原體擴增曲線,3為呼吸道合胞病毒擴增曲線,CT值分別為25.2、26.6、28.8。以上可見,BIOGHC熱啟動Taq酶具有擴增曲線典型,酶動力強勁,適合多重檢測等顯著優點。


    此外,靈敏度也是我們在選擇熱啟動Taq酶需要著衡量的標準。有些樣本中目標基因的豐度很低,非??简灍釂覶aq酶的檢測靈敏度,靈敏度高了,實驗數據自然更加真實可靠。我們將BIOG熱啟動Taq酶與T品牌的熱啟動Taq酶進行對比(如圖3):同一份呼吸道拭子樣本,用Taqman探針法檢測肺炎支原體, BIOG熱啟動Taq酶比T品牌的熱啟動DNA聚合酶檢測結果早2個CT??梢?,BIOG熱啟動Taq酶擁有超高的靈敏度,較部分同類化學封閉的熱啟動DNA聚合酶相比,更適合用于低豐度樣本的檢測。

圖3. 同一份呼吸道拭子樣本,Taqman探針法檢測肺炎支原體, BIOGHC熱啟動Taq酶(1)比知名品牌供應商T熱啟動DNA聚合酶(2)檢測結果早2個CT。


    總的來說,目前國內市場上比較知名的國外品牌如ABl、Bioline等公司的熱啟動Taq酶性能較好,國產熱啟動Taq酶中,BIOG熱啟動Taq酶的擴增性能不錯,與國外名牌產品無明顯差異,其它很多國產品牌的擴增性能不夠理想,研究者需根據自己的實驗要求和經費情況進行選擇,最好做一個梯度稀釋擴增實驗,以檢測熱啟動Taq酶的擴增效率和靈敏度。

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